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店家商品
尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
|
货号 |
名称 |
规格 |
|
RTD6163 |
尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒 |
50次 |
● 产品组成：
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货号 |
名称 |
规格 |
贮存 |
|
AC2914-02 |
40%PAA(29:1) |
100 ml |
4℃ |
|
TS050-01 |
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8 |
100 ml |
4℃ |
|
TS030-01 |
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8 |
50 ml |
4℃ |
|
RU5080 |
尿素（电泳级） |
220 克 |
RT |
|
AP020P |
APS（干粉） |
0.5 g |
RT |
|
TA0761-01 |
TEMED |
0.5ml |
4℃，避光 |
|
PL080-01 |
5×MonoColor蛋白上样缓冲液(变性,还原) |
1 ml |
-20℃ |
|
TG120P |
5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(变性电泳,粉末型) |
1 L |
RT |
|
|
说明书 |
一份 |
|
● 贮存、效期及运输：
按照标签温度贮存；有效期一年；常温运输。
● 产品简介：
本公司提供的尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。在SDS-PAGE中尿素作为辅助的变性剂，能与SDS一起彻底变性蛋白，特别是一些跨膜多次的蛋白，尿素辅助SDS可以彻底打开蛋白的高级结构。该产品可以用于Blue Native电泳分离后的二向电泳，也可以用于一些碱性蛋白如组蛋白，鱼精蛋白的变性电泳分离。
本试剂盒可配制至少50块常规大小（8×10 cm）1mm厚度的PAGE胶。
● 使用说明：
一. 配制分离胶（各试剂使用量请参考表1）
1.1 配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS溶液-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。
1.2按照表1将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
1.3 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
表1 SDS-PAGE分离胶配方表
|
组份 |
不同凝胶体积对应各组份的取样量 |
|||
|
6％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
||||
|
尿素 |
1.8 g |
3.6 g |
5.4 g |
7.2 g |
|
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
0.75 ml |
1.5 ml |
2.25 ml |
3 ml |
|
H2O |
定容至5ml |
定容至10 ml |
定容至15 ml |
定容至20 ml |
|
TEMED |
0.005 ml |
0.01 ml |
0.015 ml |
0.02 ml |
|
10％ APS |
0.05 ml |
0.1 ml |
0.15 ml |
0.2 ml |
|
8％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml |
||||
|
尿素 |
1.8 g |
3.6 g |
5.4 g |
7.2 g |
|
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
1 ml |
2 ml |
3 ml |
4 ml |
|
H2O |
定容至5ml |
定容至10 ml |
定容至15 ml |
定容至20 ml |
|
TEMED |
0.005 ml |
0.01 ml |
0.015 ml |
0.02 ml |
|
10％ APS |
0.05 ml |
0.1 ml |
0.15 ml |
0.2 ml |
|
10％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml |
||||
|
尿素 |
1.8 g |
3.6 g |
5.4 g |
7.2 g |
|
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
H2O |
定容至5ml |
定容至10 ml |
定容至15 ml |
定容至20 ml |
|
TEMED |
0.005 ml |
0.01 ml |
0.015 ml |
0.02 ml |
|
10％ APS |
0.05 ml |
0.1 ml |
0.15 ml |
0.2 ml |
|
12％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml |
||||
|
尿素 |
1.8 g |
3.6 g |
5.4 g |
7.2 g |
|
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
1.5 ml |
3 ml |
4.5 ml |
6 ml |
|
H2O |
定容至5ml |
定容至10 ml |
定容至15 ml |
定容至20 ml |
|
TEMED |
0.005 ml |
0.01 ml |
0.015 ml |
0.02 ml |
|
10％ APS |
0.05 ml |
0.1 ml |
0.15 ml |
0.2 ml |
|
15％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml |
||||
|
尿素 |
1.8 g |
3.6 g |
5.4 g |
7.2 g |
|
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8 |
1.25 ml |
2.5 ml |
3.75 ml |
5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
1.875 ml |
3.75 ml |
5.625 ml |
7.5 ml |
|
H2O |
定容至5ml |
定容至10 ml |
定容至15 ml |
定容至20 ml |
|
TEMED |
0.005 ml |
0.01 ml |
0.015 ml |
0.02 ml |
|
10％ APS |
0.05 ml |
0.1 ml |
0.15 ml |
0.2 ml |
二. 浓缩胶制备：
2.1 去除覆盖在分离胶上的水层。
2.2 按照表2将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
2.3 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
2.4 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
2.5 静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表2 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
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组份 |
不同凝胶体积对应各组份的取样量 |
|||
|
2 ml |
4 ml |
5 ml |
10 ml |
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尿素 |
0.72 g |
1.44 g |
1.8 g |
3.6 g |
|
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8 |
0.5 ml |
1 ml |
1.25 ml |
2.5 ml |
|
40％ PAA（29:1） |
0.2 ml |
0.4 ml |
0.5 ml |
1 ml |
|
H2O |
定容至2 ml |
定容至4 ml |
定容至5 ml |
定容至10 ml |
|
TEMED |
0.002 ml |
0.004 ml |
0.005 ml |
0.01 ml |
|
10％ APS |
0.02 ml |
0.04 ml |
0.05 ml |
0.1 ml |
三. 电泳：
3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液的配制-1 L：
将一包5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。
3.2 电泳：
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
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